細(xì)胞凋亡檢測(cè)通常有形態(tài)學(xué)觀察方法、DNA凝膠電泳、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)核小體測(cè)定、流式細(xì)胞儀定量分析、Western blot檢測(cè)等。 電鏡觀察:可見(jiàn)凋亡細(xì)胞表面微絨毛消失,核染色質(zhì)固縮、邊集,常呈新月形,核膜皺褶,胞質(zhì)緊實(shí),細(xì)胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體及凋亡小體被臨近吞噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象。
凋亡細(xì)胞 DNA 含量的流式細(xì)胞計(jì)分析 方法 收集細(xì)胞→70% 冷乙醇(PBS 稀釋)4 °C 固定過(guò)夜→PBS 洗滌,1 000 rpm × 10 min→RNase A(0.5 mg/ml)37 °C 消化 30 min→PI(50 mg/ml)染色,室溫避光 15 min→FACScan 分析 DNA 亞二倍體的形成及細(xì)胞 ...
細(xì)胞凋亡時(shí)主要的生化特征是其染色質(zhì)發(fā)生濃縮, 染色質(zhì)DNA在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300kbp長(zhǎng)的DNA大片段, 或180~200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜 (DNA ladder)。 細(xì)胞經(jīng)處理后,采用常規(guī)方法分離提純DNA,進(jìn)行 瓊脂 糖凝膠和溴化乙啶染色,在凋亡細(xì)胞群中可觀察到典型的DNA ladder。
形態(tài)學(xué)觀察細(xì)胞凋亡的變化是多階段的,細(xì)胞凋亡往往涉及多個(gè)細(xì)胞,即便是一小部分細(xì)胞也是非同步發(fā)生的。 首先出現(xiàn)的是細(xì)胞體積縮小,連接消失,與周圍的細(xì)胞脫離,然后是細(xì)胞質(zhì)密度增加,接下來(lái)會(huì)發(fā)生一系列的變化:線粒體膜電位消失;通透性改變;釋放細(xì)胞色素C到胞漿;核質(zhì)濃縮,核膜核仁破碎;DNA降解成為約180bp-200bp片段,胞膜有小泡狀形成;膜內(nèi)側(cè)磷脂酰絲氨酸外翻到膜表面;胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整,最終可將凋亡細(xì)胞遺骸分割包裹為幾個(gè)凋亡小體,無(wú)內(nèi)容物外溢。